产品货号:
TD0741
中文名称:
10000×SYBR核酸染料 ,电泳级
英文名称:
SYBR Green I,10000X
产品规格:
50μL|1mL|100μL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本品用DMSO溶解,因DMSO的熔点是18.5℃,使用前请放置到室温充分溶解。保存温度:-20℃,避光,有效期12个月
使用方法:
1.胶染法(用法同EB)(推荐方法,见图1)
(1)制胶时加入SYBR Green I核酸染料。冷却胶至50℃左右,每100mL胶中加入3~5μL
SYBR Green I核酸染料。
(2)按照常规方法进行电泳即可。
2.点染法(见图3)
(1)该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
(2)工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR Green I稀释100倍,即为SYBR Green I工作液。SYBR Green I工作液可以置2~8℃保存一个月以上。
(3)制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
(4)样品染色:向分析样品中加入SYBR Green I工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR Green I与样品中DNA充分结合。SYBR Green I工作液加入量为总上样量的1/5~1/10。
(5) DNA Marker染色:将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μLSYBR Green I工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR Green I与DNA充分结合。
(6)上样、电泳:按常规操作。
3.泡染法
(1)按照常规方法进行电泳。
(2)用pH7.0~8.5的缓冲液(如:TAE,TBE或TE),按照10000﹕1的比例稀释SYBR Green I浓缩液,混匀,制成染色溶液。
(3)将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10~30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4.点染+胶染法(见图2)
此法结合方法1和方法2,灵敏度最高,对于低浓度样本比EB检测更灵敏。
几种染色方法特点比较
注意事项
(1)在SYBR Green I点染法中,电泳时间不要超过2小时,否则SYBR Green I会从DNA上分离出来,
会产生弥散状条带。
(2)用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(与Marker对比),建议使用胶染法(方法1)。
(3)在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉。
(4)如果想对用SYBR Green I染过的胶进行Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%~0.3%的SDS。
(5)在紫外照射透视下,与双链DNA接合的SYBR Green I呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA则颜色为橘黄而不是绿色。
(6) SYBR Green I对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
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- 无毒性:属花箐类染料,容易生物降解,无致癌毒性。
- 灵敏度高:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25~100倍。
- 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
- 操作简单:无须脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。
- 适用范围广:可适用于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。
- 使用方便:对分子生物学中常用的酶(如:Taq酶、反转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。
- 经济:价格比银染便宜。
使用方法:
1.胶染法(用法同EB)(推荐方法,见图1)
(1)制胶时加入SYBR Green I核酸染料。冷却胶至50℃左右,每100mL胶中加入3~5μL
SYBR Green I核酸染料。
(2)按照常规方法进行电泳即可。
- 注:此方法染色可以准确确定核酸片段分子量,染料用量相对较少。1mL染料大约可以做300块100mL的胶。
2.点染法(见图3)
(1)该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
(2)工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR Green I稀释100倍,即为SYBR Green I工作液。SYBR Green I工作液可以置2~8℃保存一个月以上。
(3)制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
(4)样品染色:向分析样品中加入SYBR Green I工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR Green I与样品中DNA充分结合。SYBR Green I工作液加入量为总上样量的1/5~1/10。
(5) DNA Marker染色:将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μLSYBR Green I工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR Green I与DNA充分结合。
(6)上样、电泳:按常规操作。
- 注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与Marker对比),建议使用胶染法。
3.泡染法
(1)按照常规方法进行电泳。
(2)用pH7.0~8.5的缓冲液(如:TAE,TBE或TE),按照10000﹕1的比例稀释SYBR Green I浓缩液,混匀,制成染色溶液。
(3)将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10~30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
- 注:用泡染法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中最多的。
4.点染+胶染法(见图2)
此法结合方法1和方法2,灵敏度最高,对于低浓度样本比EB检测更灵敏。
几种染色方法特点比较
染色方法 | 灵敏度 | 染料用量 | 确定片段分子量精确度 |
胶染法(推荐方法) | 较高 | 较少 | 较高 |
点染法 | 很高 | 最少 | 大片段稍有滞后 |
泡染法 | 较高 | 最多 | 最高 |
点染+胶染法 | 最高 | 较多 | 大片段稍有滞后 |
注意事项
(1)在SYBR Green I点染法中,电泳时间不要超过2小时,否则SYBR Green I会从DNA上分离出来,
会产生弥散状条带。
(2)用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(与Marker对比),建议使用胶染法(方法1)。
(3)在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉。
(4)如果想对用SYBR Green I染过的胶进行Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%~0.3%的SDS。
(5)在紫外照射透视下,与双链DNA接合的SYBR Green I呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA则颜色为橘黄而不是绿色。
(6) SYBR Green I对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
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